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蛋白層析柱裝柱方法詳解,你還為它而發(fā)愁嗎

更新時間:2024-11-11瀏覽:2129次

 蛋白層析柱是凝膠層析技術(shù)中的主體,一般用玻璃管或有機(jī)玻璃管。根據(jù)樣品混合物中各組分在固定相和流動相中分配系數(shù)不同,從而分離的一種層析法。  

 
蛋白層析柱裝柱方法:
(1)裝柱前要仔細(xì)看填料的使用說明書,每種填料都有自己的特性,以及特殊的裝柱方法,針對不同的空柱,也要注意方法可能不同,這一點非常重要:裝柱包括以后使用中不允許柱內(nèi)進(jìn)入氣泡(bubblefree),柱頭事先也要排除氣泡。  
(2)填料要加水?dāng)嚢璩删鶆驊乙?,懸液濃度依填料而不同,一?0-85%,迅速倒入空柱內(nèi),或吸或壓,流速和具體步驟看說明書。  
(3)所有柱子盡量做到填料均勻,尤其是用于凝膠層析的柱子。裝柱完成后,可用柱效測定的方法檢查裝填效果。一個裝填合格的柱子的理論塔板高度應(yīng)是填料平均粒徑的2-4倍,在此范圍內(nèi)越小越好。  
(4)選擇合適的泵,盡量流速滿足要求,脈沖盡量小。選柱塞泵。  
(5)準(zhǔn)備上柱的液體應(yīng)進(jìn)行過濾,至少是0.45micrometre。  
(6)關(guān)于純化,首先要考慮的是你的目標(biāo):純度、數(shù)量、速度、收率等等,再根據(jù)樣品的具體情況,尤其是目標(biāo)蛋白的性質(zhì),確定純化策略。
(7)至于蛋白層析柱測序,大概不到1mg應(yīng)該足夠了。
 

 

 

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